分光熒光光度計測試時有哪些注意事項?
分光熒光光度計是一種測量熒光光譜的儀器。目前已經(jīng)廣泛應(yīng)用于各行各業(yè),特別是醫(yī)學(xué)領(lǐng)域。由于分光熒光光度計使用方法簡單,測量結(jié)果準確,所以更受市場歡迎。但是使用分光熒光光度計時一定要注意方式方法,否則會造成測量數(shù)據(jù)不準確,影響實驗效果。以下是詳細的注意事項:
?、贅悠窇?yīng)盛在四面透光的石英比色皿(熒光池)中,如果是揮發(fā)性樣品應(yīng)使用帶塞的熒光池。
?、谠谑褂梅止鉄晒夤舛扔嫙晒夥治鰰r,為了得到穩(wěn)定可靠的數(shù)據(jù),一般需要開機預(yù)熱氙燈大約30min。如果儀器光源采用的是閃爍氙燈,預(yù)熱時間可以縮短到10min左右。對某些易感光、易分解的熒光物質(zhì),可以降低人射光強度或縮短光照時間。
③溫度變化可引起分光熒光光度計熒光強度的改變。通常降低溫度,有利于提高熒光量子產(chǎn)率,熒光強度增大。溫度影響熒光強度的顯著程度因樣品而異,大部分熒光物質(zhì)的熒光強度受溫度影響不大,測試溫度變化不超過±3℃,對測試結(jié)果幾乎無影響。
?、墚敺止鉄晒夤舛扔嫷臒晒馕镔|(zhì)是弱酸或弱堿時,溶液的pH對熒光強度有較大影響。因為弱酸或弱堿在不同酸度中,分子和離子的電離平衡會發(fā)生改變,而熒光物質(zhì)的熒光強度會因其離解狀態(tài)發(fā)生改變。
?、莘止鉄晒夤舛扔嫷臒晒馕镔|(zhì)分子與溶液中其它物質(zhì)分子之間作用導(dǎo)致熒光強度降低,常見的熒光猝滅劑,如鹵素離子、氧氣重金屬離子、硝基化物質(zhì)、重氮化合物等。溶液中的溶解氧也能引起幾乎所有的熒光物質(zhì)產(chǎn)生不同程度的熒光熄滅現(xiàn)象,因此,在較嚴格的熒光實驗中必須除氧。